自营 Cell Signaling Technology 抗体 已认证 品牌介绍 Cell Signaling Technology (CST) 是一家由科学家创立的私营家族公司，致力于提供全球最高品质的创新研究和诊断产品，加速生物学认知以及实现个体化医疗。CST 坚持自主生产和严格验证，其高质量的产品和专业的研发精神已被全球客户认可，被公认/票选为细胞信号研究的金标准、最佳抗体*、研究者的选择*、PTM（蛋白翻译后修饰）年度抗体公司*、十年抗体品牌*等（*来自 CiteAb、LISA 数据报告）。CST 官网（www.cellsignal.cn） 转自：CST博士互助平台研究蛋白翻译后修饰（PTM）时，对已知位点进行筛查，研究人员可能采用WB、IHC等传统方法，但其费事费力，筛选位点数目十分有限。如果对已知或未知位点进行高通量筛选，有些实验室选择使用液相色谱-串联质谱（LC-MS）对处理后的样本进行分析，但其会因混合物复杂、修饰位点丰度低、离子化效率低等被无修饰的肽段质谱信号压制，因此在LC-MS分析之前，先进行PTM富集，有助于提高信噪比。如果您正在研究某个PTM，或您不了解PTM富集对您实验的意义，甚至更不清楚PTM富集的不同方法及选择要点，请先观看来自Cell Signaling Technology (CST）的蛋白质组学团队副总监Matt Stokes博士对这些问题的讲解。他将在使用质谱分析进行高通量鉴定的前提下，以磷酸化富集为例，结合CST客户使用的不同的富集策略，让大家最快理解并运用磷酸化富集方法。- 在质谱分析之前，磷酸化肽段富集的策略有哪些？1）基于抗体的富集2）金属亲和 Fe-IMAC 富集方法3）基于多通路抗体富集方法- CST 基于抗体的磷酸化富集使用的抗体是普通抗体吗？（视频 3分28秒） 不是，使用的是PTM/Motif抗体。开发WB、IHC等普通实验方法所使用的磷酸化抗体时，CST一般使用一种单独的肽作为抗原（如图1展示的一条磷酸肽），然后针对这种肽生产特异性抗体。对于磷酸化富集，考虑后续要进行质谱分析，所以生产的抗体稍有不同。我们会使用退化性肽库作为抗原，如图2，展示的是磷酸化丝氨酸，通过使用两种残基（RXXS*）相同、残基周围氨基酸不同的抗原肽，得到针对靶向基序 RXXS* 特异性非常高的抗体，之后这些抗体就可以广泛地与许多不同的一级氨基酸序列发生反应。 类似的，还可以用这种方法产生赖氨酸乙酰化等其他 PTM 的抗体。- 富集策略的选择：依实验目标选择（详细解读见视频 4分30秒）三种不同的富集方法针对三个不同的实验目标。 1. 基于抗体的富集覆盖范围深，虽然用这种方法只能观察到一个有限的空间，但你能深入挖掘到某些丰度较低的蛋白或化学计量较低的位点。2.金属亲和 Fe-IMAC 富集方法原理上，IMAC 会使所有磷酸肽沉淀，即覆盖范围广，适合于找到广泛的磷酸化位点。因此您实验的起始样本量较低，想要一次性富集并读出尽可能多的数据(比如酪氨酸磷酸化、苏氨酸磷酸化、丝氨酸磷酸化……)，那么，IMAC 是一项不错的选择。但它也有不足之处，比如你只研究细胞或组织中磷酸化酪氨酸水平，但后者仅占所有磷酸化的1%。低丰度导致 IMAC 富集很难对磷酸化进行深度分析。因此这种情况下推荐进行抗体富集。3.基于多通路抗体富集方法与基于抗体的富集相比，其区别之处在于所使用的抗体——PTMScan® Pathways 使用位点特异性抗体的多重混合物，也就是将一些CST目录产品放到一起，这样就能在一次富集中读出整条信号转导通路或激酶等蛋白类型的激活状态。其属于靶向覆盖，鉴定肽段的总数虽较低，但能显示出许多最关键通路蛋白的独特的磷酸化信号变化，同时，它还能得到关键靶点非修饰蛋白水平变化信息。所以，你可以根据自己的实验背景和目标选择相应的富集方法。- 3大策略：富集互补（详情见视频 10分30秒）案例分析，将未经或已经 CD3 抗体处理的 jurkat 细胞裂解物消化成肽，随后进行三种不同的磷酸化富集，再进行质谱分析。从覆盖范围（上图，定性水平）水平来看，3种方法检测到的涉及T细胞信号通路中的磷酸肽中，1%是三者都能检测出来的，但其余 99% 的磷酸肽就分别由不同的富集方法检测到的。某种意义上说明，如果你要覆盖一条完完整整的信号通路，可能需要进行三种富集策略。3个小图中，Y 轴的左边是 CD3抗体处理后信号下降的位点，右边则反之。 从磷酸化位点变化的数量（上图，定量水平）来看：IMAC 获得的总的磷酸化位点数最多，尽管这样，但pY 和多通路富集提供的上升/下降位点的比例却与 IMAC 相似。这证明了可以使用金属亲和Fe-IMAC和基于抗体富集方法进行互补富集，达到全面评估处理诱导的信号转导变化的结果。 - 富集磷酸化肽段的PTMScan®试剂盒产品 货号 产品名称 基序 Phospho-Tyr #5636 Phospho-Tyrosine Mouse mAb (P-Tyr-100) Kit y #8803 Phospho-Tyrosine Rabbit mAb (P-Tyr-1000) Kit y Phospho-Ser/Thr #5561 Phospho-Akt Substrate Motif mAb 1 Kit RXX(s/t) #5563 Phospho-Akt Substrate Motif mAb 2 Kit RXRXX(s/t) #5564 Phospho-AMPK Substrate Motif Kit LXRXX(s/t) #12267 Phospho-ATM/ATR Substrate Motif Kit (s/t)Q #12170 Phospho-CK2 Substrate Motif Kit (s/t)(D/E)X(D/E) #14990 Phospho-MAPK Substrate Motif Kit PXtP #4652 Phospho-MAPK/CDK Substrate Motif Kit PXsP, sPX(K/R) #10821 Phospho-PDK1 Docking Motif Kit (F/Y)(s/t)(F/Y) #5565 Phospho-PKA Substrate Motif Kit (K/R)(K/R)X(s/t) #71652 Phospho-PKC Substrate Motif Kit (K/R)(K/R)X(s/t)X(K/R) #14989 Phospho-Ser-Pro-Pro Motif Kit sPP #5566 Phospho-ST*P Motif XP® Rabbit mAb Kit StP #5567 Phospho-T*PP Motif XP® Rabbit mAb Kit tPP #91336 Phospho-Thr-X-Arg Motif [pTR] Kit tXR Motif Antibody Mixes #32948 Basophilic Kinase Substrate Motif Kit (R/X)(R/X)X(s/t) #25081 Phospho-Ser/Thr Motif Kit (s/t) #28303 Phospho-Ser/Thr-Pro Motif Kit (s/t)P Other Enrichments #20432 Phospho-Enrichment IMAC Fe-NTA Magnetic Beads (s/t/y) #75676 Multi-Pathway Enrichment Kit Signaling Pathways 若您刚刚入门PTM研究，建议您继续阅读： -磷酸化富集深入学习-深度解析 | 磷酸化肽段富集策略多通路抗体富集方法-磷酸化抗体使用指南-磷酸化抗体使用建议，听听CST专家怎么说-利用蛋白质组学研究蛋白质相互作用-蛋白互作结合力弱？瞬时结合？蛋白质组学新方法各个击破- 蛋白修饰研究策略分析系列 -（一）蛋白质的鉴定与筛查（二）蛋白修饰位点的搜索及预测（三）蛋白修饰的检测（四）蛋白修饰相关的蛋白功能分析 点击下载《简易蛋白质组学》，全面了解CST PTMScan® 产品及服务。  您知悉并同意，丁香通平台展示产品并非为平台自身产品，您发起询价或试用申请后，平台将会把您已提供或按要求提供的相关信息同步提供至所咨询的具体产品商家，由商家为您提供具体产品的价格咨询或产品试用注意事项及相关试用产品或完成相应购买，因此您知悉并授权平台将您的信息进行同步共享。您有权拒绝，但您知悉将无法参加询价或试用活动。